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大分子多肽基因工程表达
发布时间:2013年03月20日来源:字体:[大][中][小]

        大分子多肽和小分子蛋白在新药研发领域越来越受到人们的重视。一般认为, 小于30 个氨基酸的多肽适合于化学合成, 容易实现产业化,大于100个氨基酸的蛋白质可利用基因工程技术直接进行表达。30~100个氨基酸的多肽采用固相合成法合成纯度要求很高,不但产量低, 而且成本高,环保问题突出。
        如何以高效的方法获取此类分子是一个迫切需要解决的问题。虽然基因工程表达技术非常成熟,但直接表达多肽或小分子蛋白却并不稳定, 往往很容易被蛋白酶降解。目前大肠杆菌表达载体有非融合表达、融合表达、分泌表达、带伴侣分子表达。融合蛋白的表达系统可以克服转录与转录后水平对外源基因表达可能带来的不利影响,我们利用大肠杆菌融合表达系统建立了大分子多肽的基因工程表达技术平台,通过构建特殊的体外蛋白酶加工位点,使高效表达的多肽经过下游工程技术的处理获得完整天然多肽序列。
        以31个氨基酸的多肽为例,构建的高效表达工程菌株表达量达到30%,目标产物纯化后经过生物工程下游技术的处理得到的多肽质谱分析表明和理论分子量(3384da)是一致的。

技术特点

   1、表达量高,目标蛋白达到菌体全蛋白的30%;

   2、成本低,大肠杆菌发酵周期短,物料需求简单,生物转化率快,降低成本;

   3、节能环保,基因工程表达工艺不涉及有机溶剂,是环境友好型工艺;

   4、纯度要求95%,由于工艺改进,杂质的性质改变,按生物药申报。

                    

  Fig.1、expression analysis        Fig.2、MS analysis of purified peptide        Fig.3、HPLC analysis of purified peptide