产品名称:BioScript IV 反转录酶
产品简介: BioScript Ⅳ Reverse Transcriptase (RTase) 是经过高度纯化的第四代反转录酶。具有更高的热稳定性，特异性和cDNA产量明显提高。

概 述 

        BioScript Ⅳ 反转录酶(RTase)是一种重组M-MLV反转录酶。本产品采用大肠杆菌表达体系，是经过高度纯化的重组酶。该酶的RNA酶H活性很低，改造后具有更高的热稳定性，广泛应用于第一链cDNA 的合成，反转录温度高达75°C，特异性和cDNA产量明显提高，长度明显大于第一、第二，第三代反转录酶。BioScript Ⅳ RTase产生的cDNA特异性更好。 

包 装 

        BioScript Ⅳ RTase(200 U/μl)    2,000 U        10,000 U 

        5X RT 缓冲液                               1.0 mL           1.0 mL

使用方法

        第一链cDNA的合成 

1、在灭菌离心管中加入： 

        RNA 模板 (10 pg~5 μg 总RNA 或者10 pg~500 ng mRNA) 

        1 µL oligo(dT)20 (50 μM), 或者其他引物         

        1 µL 10 mM dNTP Mix                            

        补加DEPC处理水至终体积14µL. 

2、65°C 加热3-5min，离心后置冰浴备用； 

3、加入: 

       4 μl 5X RT缓冲液(根据需要加DTT)  

       1 μl RNA酶抑制剂(10 U/µL,可选择)

       1 μl BioScript III RTase (200 units/μl)

       终体积20 µL 

       如果产生的cDNA长度大于5 kb，反转录温度高于50°C，应该使用基因特异性引物或者oligo(dT)20，为了提高产量，BioScript Ⅳ RTase的量可提高到400U (2 μl)； 

4、通常37°C进行反转录反应15min，50°C保温30–60min，特异性明显提高，基因特异性引物温度可提高到55°C，对于复杂的模板或者二级结构含量高的模板，温度也可以提高到55°C，本产品反转录温度可提高到75°C；

5、90°C处理5 min使酶失活； 

6、将反转录产物置-20°C备用或者取2µl第一链cDNA合成产物继续进行PCR扩增。

    对于有些目的基因(>1 kb)的扩增，可能需要去除与cDNA互补结合的RNA。去除互补RNA的方法：反转录产物加入大肠杆菌RNase H 1 μl (2 units)，37°C保温20 min。 

保 存 

        保存于-20°C，缓冲液使用前室温化冻，使用后立即冻存。 

订货信息

        RE-20-001   BioScript IV 反转录酶