概述

        同源重组是一种简单、快速并且高效的DNA 无缝克隆技术，可将插入片段定向克隆至任意载体的任意位点。INDUMY^TM同源重组酶是基因工程表达的将PCR产物快速、定向地克隆到任何目标载体的专用酶，用户可使用任意方式将载体进行线性化；在插入片段正/ 反向PCR引物5’端引入线性化载体的末端序列，使得PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化载体末端一致的序列(8 bp~30 bp)。这种两端带有载体末端序列的PCR 产物和线性化载体按一定比例混合后，在INDUMY^TM同源重组酶的催化下，反应20~30 min即可进行转化，完成定向克隆，阳性率可达95%以上，原理如图所示。采用本产品进行克隆可避免常规方法涉及的限制性内切酶种类的选择、磷酸化、补平、加A等步骤，使克隆变得简单快速。

包装

        1000次/支

保存缓冲液

        10 mM Tris-HCl，300 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.5

使用方法

1、载体体线性化：通过酶切或反向PCR获得线性化载体；

2、插入片段获得：将线性化载体末端8 bp - 30 bp序列作为同源序列，并将其分别添加到基因特异性正/反向扩增引物序列的5’端，以此引物对扩增得到带有同源序列的插入片段；

3、重组反应：将线性化载体和插入片段按比例混合，在INDUMY^TM同源重组酶的催化下，37℃反应30 min即可完成重组反应，实现两线性化DNA的体外环化；

        线性化载体(100-200ng/ul)                                                     X ul

        PCR产物(100-200ng/ul)                                                        Y ul

        10X buffer                                                                              2 ul

        INDUMY^TM同源重组酶                                                         1 ul

        去离子水                                                                               M ul

        总体积                                                                                  20 ul

4、转化感受态细胞：重组产物直接进行转化，平板上会形成数百个单克隆供后期阳性筛选。

保存

        保存于-20℃。

订货信息

        货号：RE-22-001  INDUMY^TM同源重组酶